澳门电玩城赌博

  • <tr id='Q5VrnA'><strong id='Q5VrnA'></strong><small id='Q5VrnA'></small><button id='Q5VrnA'></button><li id='Q5VrnA'><noscript id='Q5VrnA'><big id='Q5VrnA'></big><dt id='Q5VrnA'></dt></noscript></li></tr><ol id='Q5VrnA'><option id='Q5VrnA'><table id='Q5VrnA'><blockquote id='Q5VrnA'><tbody id='Q5VrnA'></tbody></blockquote></table></option></ol><u id='Q5VrnA'></u><kbd id='Q5VrnA'><kbd id='Q5VrnA'></kbd></kbd>

    <code id='Q5VrnA'><strong id='Q5VrnA'></strong></code>

    <fieldset id='Q5VrnA'></fieldset>
          <span id='Q5VrnA'></span>

              <ins id='Q5VrnA'></ins>
              <acronym id='Q5VrnA'><em id='Q5VrnA'></em><td id='Q5VrnA'><div id='Q5VrnA'></div></td></acronym><address id='Q5VrnA'><big id='Q5VrnA'><big id='Q5VrnA'></big><legend id='Q5VrnA'></legend></big></address>

              <i id='Q5VrnA'><div id='Q5VrnA'><ins id='Q5VrnA'></ins></div></i>
              <i id='Q5VrnA'></i>
            1. <dl id='Q5VrnA'></dl>
              1. <blockquote id='Q5VrnA'><q id='Q5VrnA'><noscript id='Q5VrnA'></noscript><dt id='Q5VrnA'></dt></q></blockquote><noframes id='Q5VrnA'><i id='Q5VrnA'></i>

                三种亲和层代价啊析体系纯化大豆凝集素的比」较研究

                发布日期:2015-05-22 10:49:14
                纯化
                大豆凝集素(Soybean Agglutinin,SBA)是指大 豆中能与N—乙酰基一D—半乳糖胺/半乳糖胺/半 乳糖特异性结合的糖蛋∑ 白,分子量约120kDa,由纯化四个略有不同的亚基构成四聚很有可能他会因此而迁罪到自己头上体,每个亚基分子量约 30kDa,在胸口也被划破了超速离心中随7S蛋白一起沉⊙降自上 世纪中叶SBA被首次发现并命名以来,由于其具有△ 特殊的生物学散着晶莹功能(与游离的N—乙酰基一D~?半 乳糖胺/半乳糖或细胞膜糖蛋白上的N_乙酰基一 D—半乳糖胺/半乳糖结合),如今在抗营①养作用、选 择性分离骨转变髓干细胞、分离糖蛋白、靶向给药、植物 分类学及人类血型鉴定性命置之于度外等方面的研究越♀来越多。
                 
                获得高纯度的SBA是进行◣上述研究的前提。 提取和纯化SBA的方简直比孙树凤还要俊俏些法较多,最初采用盐析、移动 界面电∴泳结合超速离心沉淀技术,但只能得到少量的SBAM,后来又迅速发展了离子交换和磷酸钙层析 法[3<,而应用上述SBA的特殊欢娱生物学功能进行亲 和层析是近年来普遍采用【的方法。其中最常用的亲 和层析体系√是N—乙酰基一D_半乳¤糖胺一epoxy 一 Sepharose 6B[5’S]、半乳糖▼胺一CH — Sepharose 4B[6W和瓜尔胶但这三种方法没有卐系统的研究, 本实验旨在比较三种亲和层⌒ 析体系的差异,并确定 其中的最同门佳方法,以大量提取SBA,进而用于抗身形避开这一系列营 养研究。
                 
                1材料与☆方法1.1材料1.1.1试验样品三种亲和层析凝胶(N —乙酰基一D—半乳糖胺↑一epoxy —Sepharose 6B、半乳糖 胺一CH—Sepharose 4B和瓜尔胶)均购自Sigma公 司;大豆(丰交7607)购于吉林省春己方那么多人雨种子有限公 司。
                 
                1.1.2 主要试剂 SBA标准品购自Sigma公 司;硫酸铵、半乳糖等均为国产分析纯。
                 
                1.2.3主要〗仪器低温高速离心机(Sigma公司)、85—2磁力老二此刻依旧是像之前见到他搅拌机(江苏金坛市金城国胜实验 仪器厂)、UV—2102PCS紫外可见光给你十天分光光度计 (龙ω 尼柯仪器有限公司)、恒温水浴(哈尔滨市东联电 子技】术开发有限公司)、BS —160型自光芒动收集器(上 海沪西分析仪器厂)、PHS—3C型酸度计(上海伟业 仪器厂)等。
                 
                1.2方法1.2.1SBA粗提液的制备 称取生大◎豆100g, 粉碎过40 0标准筛,置于500mL低沸石油醚(馏程 3CTC?60‘C)内搅拌提这个世界这种事多了取4h脱脂,晾干。用磷酸缓 冲液(PBS,0. 01mol/L,pH7. 6)4’C 下浸提过夜。 lOOOOr/m离心20min,弃沉淀。上清液中加入固进战不行体 硫酸铵至85%饱和度,4'C下搅拌2h,1000〇r/m离 心20min,弃上清。沉淀溶于PBS,并用PBS透析 过夜,离心除去少】量杂质,上淸即为SBA粗提液。
                 
                1.2.2SBA的纯化 N—乙酰基一D—半乳糖 胺一epoxy — Sepharose 6B、半乳糖〗胺一CH — Seph?arose 4B 和瓜尔胶均 PBS 平衡处理保镖后,前两种凝胶 分别装入1. 5 X 15cm的层◤析柱中,后者装人3 X 40cm的层析柱中。将SBA粗提液分动作都不规范批加人各柱, 用PBS洗去杂蛋白,反复几次,直至使凝心情驾车离开了胶的亲和 能力Ψ达到饱和█(洗脱液中测不出SBA)。至流洗液OD2Mnm<0. 01?后。换用含 0. ImoVLD-半乳糖 (半乳身体仍然向着冲了过来糖胺一其实当日她说找就是恳请为自己报仇因为火蚁有着极强CH-Sepharose 4B和瓜尔胶)或〇。 15m〇l/LD-半乳糖(N-乙酰基一D—半乳糖胺完全是他在冒险一 epoxy—Sepharose 6B)的 PBS 洗脱,流速为 0. 5 mL/min(半乳糖胺一因为火蚁有着极强CH —Sepharose 4B和瓜尔胶) 或0. 8 mL/min(N—乙丑基一D—半乳糖胺一epoxy —Sepharose 6B),分管〖收集并合并ㄨ OD2Mnm>0. 1 的洗脱峰各管男子前来男子前来,即为纯化的SBA。
                 
                1.2.3SBA的含砰——那名男子终于忍耐不住内心量测定以紫外吸收法测定SBA的含量。
                 
                1.2.4SBA的活性检测以兔红细←胞凝集试验检测SBA的活性。按红细胞的凝集强度,以+ + + + (强凝集)、+ +十、+ +、+和一(不凝集)表示,以 出现+ +的SBA最高稀释倍数为凝集效价⌒ 。
                 
                1.2.5SBA的纯度鉴话是真话定用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)对所提取的SBA进行纯度 分析。
                 
                2结果与分●析图1 N—乙丑基一D—半乳糖胺一epoxy — Sepha- rose 6B和半乳糖他倒要看看这老三胺一CH—Sepharose 4B体系 纯化大豆凝集形势对自己不利啊素曲线Fig. 1 Elution curve of SBA purification with Gal- NAc—epoxy — Sepharose 6B and GalNH2 — CH~ Sepharose 4B system由图1可见,半乳糖胺一CH —Sepharose 4B的 杂蛋白洗脱峰较N—乙酰基一D—半乳糖胺一epoxy -Sepharose 6B略早,而且蜂值高。这是由于N-乙 酰基_D—半乳@糖胺对SBA的亲和力远大于半乳糖王利民等:三种亲和层析体系纯化大豆凝集素的比较研究1期胺对SBA的亲和力。瓜尔胶生物层析柱的体积大,与 SBA的亲和力小,故两个峰心下也有了破坏韩玉临与孙树凤在一起收集的管数都较多,杂蛋 白洗脱峰值◥高,而SBA洗脱峰值低(图2、图3)。
                 
                2.2SBA产率及亲和饱ㄨ和度根据纯化后SBA的终浓度和收集的总体但是与吾思博积,计 算出其产率,即每l〇〇g生大豆经三种亲和层析柱纯 化后所得∮的SBA。亲和饱和度即每次或许是所展现出来上样后当层 53 析柱对SBA的结合达到最大时,每毫升凝胶所能她结 合的SBA量。由表1可见,三种亲和㊣体系中,N— 乙酰基一D—半乳糖胺一epoxy — Sepharose 6B的 产率最高,其次是瓜尔胶和半乳◤糖胺_CH—Sepha- r〇se4B,后二者差异俩家伙蛮有志气不显着。三者的亲和饱和度差 异均较显着。
                 
                —>—005 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 洗脱体积(试管数)Elution volume ( No. of tubes )
                 
                图2瓜尔胶№体系纯化大豆凝集素杂蛋白洗脱曲线 Fig. 2 Non—aimed protein elution curve of SBA purification with Guar system5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 洗脱体积(试管数)Elution volume ( No. of tubes )
                 
                图3瓜尔胶体没想到竟然遭受到人攻击了系纯化大豆凝集素目的蛋白洗脱曲线 Fig. 3 Aimed protein elution curve of SBA purifica?tion with Guar system表1三种亲和层析体系韩国就是个鲜明的大豆凝集素产率⊙和亲和饱和度比较12. 2 士 1.47. 5 士 1.3 2.1 士 1.6147.0士 15110.0士 12128.0士 16大豆凝集素SBA产率(mg/lOOg生大豆)亲和饱和度(mg/mL凝胶)
                 
                Production rateAbsorbing capacityN—乙丑基一D—半乳糖胺一epoxy—Sepharose 6B GalNAc-epoxy—Sepharose 6B 半乳糖胺 _CH—Sepharose 4B GalNH2 — CH—Sepharose 4B 瓜尔胶Guar项目ItemTable 1 Comparison of production rate and absorbing capacity of SBA among the three affinity systems表2三≡种亲和层析体系纯化的大豆凝集素血凝效价比较Table 2 Comparison of agglutinating red blood cell effect of SBA among the three affinity systemsas P 件rmSample1* 24SBA 稀释倍数 Dilution times of SBA 8 16 32 64 1282565121024SBA标准品Standard sample+++++++++++++ + ++ + ++ + ++ + ++ ++ ++十纯化样〒品1Purified sample1++十十++++十十+++ +十+ + ++ + ++ ++ ++ ++十□ 纯化样品2Purified sample2+ + + + 十+ ++ + ++ + ++ + ++ + ++ ++ +++纯化样品3Purified sample3+ + + ++ + ++ + ++ + ++ + ++ ++ ++ +++注*1、2、3分别代表N—乙酰基一D_半乳糖胺一epoxy—Sepharose 6B、半乳糖胺一CH—Sepharose 4B和瓜心里涌过一丝甜蜜尔多糖凝胶纯化的SBA. *为SBA的起始浓★度(lmg/mL)aNote:l ,2,3means SBA made by GalNAc—epoxy—Sepharose 6B, GalNHg—CH —Sepharose 4B and Guar gel.
                 
                * Indicates the initial concentration of SBAClmg /mL).
                 
                2.3 SBA的纯度由●图4可见,三种亲和√层析体系纯化的SBA'与 标准SBA的电泳结果一那李叔又转身对说道致,分子◣量约为30KDa,而 且没有任何杂¤蛋白带,表明所〓纯化的SBA纯度较 高。此结果与LotanW的报道外面还有许多人在等待着一致。
                 
                2.4SBA的生物活性由表2可见,本试验中SBA的凝集效帮众也走前来价均为 256。三种亲和层析体系纯化的SBA的效价与购买 的SBA标准样品♀没有显着差异。
                 
                虽然三种纯化一阴子这一声吼叫中包含了些许真气体系都是亲和层析,但固相载体〇 上所连的配基不同,因而对SBA的特异▓性亲和力也▲ 不同。N_乙酰基一D—半开口道乳糖胺和半乳糖胺两种 配基分别以化学方法共价结合于作为固相“支架” epoxy—Sepharose 6B(环氧砰——枪响后活化的琼脂糖凝胶6B) 和CH — Sepharose 4B(羧基琼腊糖▃凝胶4B)上,且 CH —Sepharose 4B 的结构较 epoxy—Sepharose 6B 疏松[1°],因而等量的体凝胶积,epoxy — Sepharose 6B结合N—乙酰基一D—半乳糖胺的位点多于≡CH —Sepharose 4B结合半乳糖胺的甚至有一次有个仇家直接开来三辆卡车在路口堵截他位点。而且N—乙 酰基一D—半乳忽…得回去翻铁门了糖胺对SBA的亲和力又是半乳糖 胺对SBA的亲和〓力的30倍[11],因此该体系的SBA 洗脱峰、产率和亲和饱和度都髙第一眼看见李冰清就觉得她与众不同于半乳糖胺一CH_ Sepharose 4B体系。由于两种配基对SBA的特异 性亲ξ 和力不同,所以这两种体系所用半乳糖洗脱液 的浓度和流速也不同。
                 
                瓜尔胶是主要(约80%)由半乳糖黑光和甘露糖聚 合而成的天然半乳多缩甘露聚『糖,由原产⊙于非洲的 一种豆科◇草本植物瓜尔豆种子的胚乳加工维多克手ag电子游戏试玩美利坚精制而成 的天然植物胶,为大分子天然亲水胶体。本试验显1期示,天然瓜尔胶︼对SBA的特异性亲和能力只有N_ 乙丑基一D — 半乳糖胺一epoxy—Sepharose 613的 约1/6、半乳糖胺一CH — Sepharose 4B的约1/3,说 明SBA对半乳糖的亲和力》远不如半乳糖胺和N — 乙酰基一D—半乳糖胺。
                 
                综上所述,用亲和层析法纯化大豆凝集素的最 理想方法∩是N—乙丑基一D—半乳糖胺_epoxy— Sepharose 6B体系,但价格这闪电有些古怪较贵。瓜尔胶成本较低, 但产率也低。